维普资讯 http://www.cqvip.com ＮＯＳ、Ｃａ２＋ ７ ・６３９・ ４参考文献 １ Ｂｅａｌ ＭＦ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｔａｋｅ ｃｅｎｔｅｒ ｓｔａｇｅ ｉｎ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ７王月华，杜冠华．Ｌ肉毒碱对Ｄ一半乳糖衰老模型小鼠的作用［Ｊ］．中 国老年学杂志，２００３；２３（１）：４９－５１． ８ Ｍｅｉｓｓｎｅｒ Ｃ，Ｍｏｌ￣ｍｅｄ ＳＡ，ｙｏｎ Ｗｕｒｍｂ Ｎ，ｅｔ ．Ｔｈｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｌｌ ８ｅｎｏｍｅ ａｉｎ ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ，２００５；５８（４）：４９５－５０５． ２ Ｓａｓ￣ｅ Ｊ，ＰａｌｌａｎｔｏＦＶ，Ｖｉｎａ Ｊ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆｍｉｔｏｃｈｏｎｄＩ￣ｌ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ螂ａｎｄ ａｓｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ Ｇｅｍｎｔｏｌ Ｇｅｒｉａｔｒ，２００１；３４（６）：４４７．５１． ９ Ｌｉｎ ＰＨ，Ｌｅｅ ＳＨ，Ｓｕ ＣＰ，ｅｆ ａＬＯｘｉｄａｔｉｖｅ ｄａｍａｇｅｔｏｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｌ ＤＮＡｉａｎ ａｇｉＩＩｇ［Ｊ］．Ｆｒｅｅ蹦ｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ，２００３；３５（１）：１－８． ３ Ａｌｅｘｅｙｅｖ ＭＦ，Ｌｅｄｏｕｘ ＳＰ，Ｗｉｌｓｏｎ ＧＬ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ａｎｄ硒ｒＩｇ［Ｊ］． Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ（Ｌｏｎｄ），２ＯＯ４；１０７（４）：３５５－６４． ａｔｒｉａ］ｍｕｓｃｌｅ ｏｆ ｐａｉｔｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｒｉａｌ ｉｆｂｒｉｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ， ２００３；３５（１０）：１３１０－８． １０ Ｚｅｎｇ Ｚ；Ｚｈａｎｇ Ｚ，Ｙｕ Ｈ，ｅｔ ａ／．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｌ ＤＮＡ ｄｅｌａｅｔｉｏｎｓ ａｒｅ ａｓｓｏｅｉａｔ－ ４海春旭．抗氧化剂、抗衰老与疾病控制的研究进展［Ｊ］．疾病控制杂 志，２ＯＯ２；６（４）：２８９－９３． ５ Ｏｌｉｖｅｉｒａ ＰＪ。Ｒｏｌｏ ＡＰ，Ｓａｎｈｏ ＶＡ，ｅｔ ａ／．Ａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｕ∞ｏｆｃａｒｖｅｄｉｌｏｌ ｖｅｉ＇ｓｕｓ ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｃａｒｄｉａｃ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｌ ｆａｕｎｃｔｉｏｎ ｅｄ ｗｉｔｈ ｉｓｅｈｅｍｉａ ａｎｄ ａｇｉｎｇ ｉｎ Ｂａｌｂ／ｃ咖８ｅ ｂｒａｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｎｃｈｅｍ， １９９９；７３（４）：５４５－５３． ［２００６４）４－２１收稿２００６－０８－１０修回］ ［Ｊ］． ｖ Ｐｍ＇ｔ Ｃａｒｄｉｏｌ，２０Ｏ４；２３（１０）：１２９１－８． ６缪明永，蔡在龙，俞超芹．衰老大鼠肝线粒体质与量的改变［Ｊ］．第 二军医大学学报，１９９８；１９（６）：５２４－６． （编辑张慧） 褪黑素对阿尔茨海默病模型大鼠ＮＯＳ、Ｃａ２ 和神经元凋亡的影响 王建平【摘李楠李 昕（郑州大学第二附属医院神经内科，河南 郑州４５０００３） Ｗｉｓｔａｒ大鼠 要】 目的研究褪黑索（ｍｅｌａｔｏｎｉｎ，ＭＴ）对阿茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ８ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）的ＮＯＳ、Ｃａ２ 及神经元凋亡的影响。方法４８只随机分为ＡＤ组、ＡＤ－ＭＴ大剂量干预组、ＡＤ－ＭＴ小剂量干预组和假ＡＤ组。应用Ｂ－淀粉样蛋白（ＡＢ）注鼠海马ＣＡＩ区，建立大鼠ＡＤ模型。 ＡＤ－ＭＴ干预组以ＭＴ灌胃，每日一次直至试验结束。应用电迷宫检测大鼠学习记忆情况，用比色法，还原法和Ｔｕｎｅ１法检测海马钙离子（ｃａ２ ）， 一氧化氮合酶（ＮＯＳ）含量以及海马神经元凋亡情况。结果ＭＴ可以明显改善ＡＤ大鼠的学习记忆能力，同时可不同程度的抑制因ＡＢ在脑内的沉 ＭＴ对ＡＤ有显著的脑保护作用。 积所导致海马的ｃａ２ 超载，ＮＯＳ的异常增高以及海马神经元的凋亡。结论【关ｔ词】阿茨海默病；褪黑索；钙离子；一氧化氮合酶；凋亡 【中圈分类号】Ｒ７４９．Ｉ ６ ［文献标识码】Ａ ［文章编号】１００５－９２０２（２００７）７－００６３９－０２ 阿茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ８ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）是一种发病机制非 常复杂的疾病，难以用一种假说解释清楚，兴奋性神经毒素、淀 粉样蛋白代谢异常、自由基损伤在发病过程中均起一定作 用…。近年来，褪黑素的研究成为热点之一，褪黑素（ｍｅｌａｔｏ－ ｎｉｎ，Ｍｒ）具有脑保护作用，但具体机制不明。本研究用ＡＤ大 鼠模型，探讨ＭＴ对ＡＤ大鼠Ｃａ“、ＮＯＳ、凋亡的影响，以期揭示 ＭＴ的脑保护作用，为ＭＴ防治ＡＤ提供理论依据。 １材料与方法 中切口。暴露前囟，参照大鼠脑立体定位图谱，ＡＤ组用微量注 射器注入ｐ一淀粉样蛋白（ＡＩ３。舶）１ （１０ 组脑内相同部位注入等量生理盐水 】。 １．２．３给药方法大鼠随机分为ＡＤ组、ＡＤ・ＭＴ大剂量干预 ）至右侧海马 ＣＡ１区，坐标为前囟后Ｉ．４ ｍｍ、旁２．５ ｍｍ、深７．２ ｍｍ。假ＡＤ 组、ＡＤ—ＭＴ小剂量干预组和假ＡＤ组。所有大鼠于手术前均用 Ｙ一迷宫进行学习记忆训练，连续３０次未达标准者（标准为连续 １０次电击有９次（９／１０）逃避至安全区）将其淘汰 】。ＡＤ组和 假ＡＤ组于手术后生理盐水灌胃，ＡＤ—ＭＴ小剂量干预组和ＡＤ． ＭＴ大剂量干预组手术后分别以ＭＴ ２．５、１０ ｍｇ／ｋｇ灌胃，每天 给药一次。 １．２．４学习和记忆能力测定连续给药６０ ｄ后采用Ｙ．迷宫 １．１动物１．２方法 Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠４８只，３—４月龄，体重１８０—２５０ ｇ，由郑州大学实验动物中心提供。 １．２－１ 试剂与仪器Ａｐ。舶、ＮＯＳ试剂盒（北京兴瑞试剂公 进行学习和记忆能力的检测 。大鼠学习成绩以连续１０次电 击有９次（９／１０）逃避至安全区（无电击的区域）为达标，以每 组大鼠达标所需平均电刺激次数表示智力程度。 司）；褪黑素（美国ｓｉｇｍａ公司）；Ｃａ“试剂盒（南京科欣生物研 究所）；细胞凋亡试剂盒（武汉博士德公司）；脑立体定位仪、 ７２３０分光光度仪（上海第二仪器厂）；ＢＦＸ４－８０离心机（南京离 心机厂）；Ｙ型电迷宫（中国药物研究所）。 １．２．５ 海马ｃ８．２ 、ＮＯＳ、神经元凋亡的测定行为学测验结束 后，每组大鼠随机取出６只，断头取脑、分离海马，匀浆离心后， １．２．２模型制备应用３．６％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠 取上清液以甲基百里香酚蓝比色法测定ｃａ“含量。余下的各 组大鼠用１０％水合氯醛腹腔麻醉，暴露心脏，通过左心室插管 至主动脉，生理盐水１００—１５０ ｍｌ冲洗，４％多聚甲醛溶液１５０ ｍｌ快速灌注，２５０ ｍｌ慢滴，２ ｈ后取脑，分离海马，做冰冻冠状连 续切片，测定ＮＯＳ、神经元凋亡情况。 （１ｍｌ／１００ ｇ），将麻醉后的大鼠固定在立体定位仪上，头顶部正 作者简介：王建平（１９５６・），男，教授，硕士生导师。主要从事缺血性脑病 的研究。 维普资讯 http://www.cqvip.com ・６４Ｏ・ 中国老年学杂志２００７年４月第２７卷 １．３统计学处理各组数据均用 ±ｓ表示，用ＳＰＳＳ１０．０统 干预治疗，结果显示ＭＴ可明显改善ＡＤ大鼠的学习记忆能力， 减少海马神经元凋亡，具有明确的神经保护作用，且呈剂量依 赖关系。 计软件包做配对ｔ检验。 ２结果 ＭＴ的神经保护作用机制是多方面的，至少可通过以下两 ＡＤ组大鼠达到学 ２．１ ＭＴ对ＡＤ大鼠学习记忆能力的影响个途径发挥保护作用：（１）ＡＩ３的沉积可诱发大量氧自由基释 放，继而导致高反应性ＯＨ・的形成，引起脂质过氧化反应和自 由基链式反应，破坏力极大 。蛋白质和ＤＮＡ被自由基攻击 后，导致细胞内的许多稳态系统包括钙调节系统受损。当细胞 会标准所需的电击次数为（８８．７±４．８７）次；ＡＤ—ＭＴ小剂量干 预组为（８０．７±３．４５）次；ＡＤ—ＭＴ大剂量干预组为（６６．５± ２．２３）次；假ＡＤ组为（５４．３±４．５４）次。ＡＤ组的学习记忆有明 显损伤，与假ＡＤ组相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）；ＡＤ—ＭＴ小剂量 内的ｃａ 持续升高并同时存在自由基时，出现恶性前馈（ｆｅｅｄ－ 干预组与ＡＤ组相比虽无统计学意义，但也有改善。ＡＤ．ＭＴ大 剂量干预组学习记忆能力有明显改善，与ＡＤ组相比有明显差 异（Ｐ＜０．０１）。ＭＴ对ＡＤ大鼠的学习记忆改善作用呈剂量依 赖关系。 ２．２ ＭＴ对ＡＤ大鼠海马Ｃａ 的影响ＡＤ组大鼠海马Ｃａ 含量为（５．２５±０．２３）ｍｍｏｌ／Ｌ；ＡＤ—ＭＴ小剂量干预组为（３．７１± ０．４５）ｒｅｏｔｏｌ／Ｌ；ＡＤ・ＭＴ大剂量干预组为（２．６７±０．１０）ｍｍｏＬ／Ｌ； 假ＡＤ组为（２．０３±０．４４）ｍｍｏｌ／Ｌ。与假ＡＤ组相比ＡＤ组大鼠 海马ｃａ“含量明显增高（Ｐ＜０．０１）；与ＡＤ组比较，ＡＤ．ＭＴ小 剂量干预组大鼠海马ｃａ“含量减少（Ｐ＜０．０５），ＡＤ．ＭＴ大剂量 干预组显著减少（Ｐ＜０．０１）。表明ＭＴ能够抑制ＡＤ大鼠海马 Ｃａ２ 含量的升高，且呈剂量依赖关系。 ３ ＭＴ对ＡＤ大鼠海马ＮＯＳ的影响ＡＤ组大鼠海马ＮＯＳ 表达的阳性细胞数为（６５．２５±０．２３）＋／２００个神经元：ＡＤ．ＭＴ 小剂量干预组为（３９．７１±５．４１）＋／２ｏ０个神经元；ＡＤ．ＭＴ大剂 量干预组为（２０．１０±０．１０）＋／２００个神经元；假ＡＤ组为 （１２．００±０．９４）＋／２０ｏ个神经元。可看到与假ＡＤ组相比。 ＮＯＳ在ＡＤ组大鼠海马的表达明显增高（Ｐ＜０．０１）；与ＡＤ组 比较，ＡＤ—ＭＴ小剂量干预组大鼠海马的阳性细胞数减少（Ｐ＜ ０．０５）‘，ＡＤ—ＭＴ大剂量干预组显著减少（Ｐ＜０．０１）。表明ＭＴ 能够抑制ＮＯＳ在ＡＤ大鼠海马的表达，且呈剂量依赖关系。 ２．４ ＭＴ对ＡＤ大鼠海马神经元凋亡的影响ＡＤ组大鼠海马 神经元凋亡细胞数为（６０．５２±４．８２）＋／２００个神经元；ＡＤ．ＭＴ 小剂量干预组为（４７．２７±５．０１）＋／２００个神经元；ＡＤ．ＭＴ大剂 量干预组为（２ｏ．１０±６．Ｏ１）＋／２ｏｏ个神经元；假ＡＤ组为（４．２０ ±０．１４）＋／２００个神经元。与假ＡＤ组相比ＡＤ组大鼠海马神 经元凋亡个数明显增高（Ｐ＜０．０１）；与ＡＤ组比较ＡＤ．ＭＴ小剂 量干预组大鼠神经元凋亡个数减少（Ｐ＜０．０５），ＡＤ．ＭＴ大剂量 干预组显著减少（Ｐ＜０．Ｏ１）。表明ＭＴ对ＡＤ大鼠海马神经元 有保护作用，且呈剂量依赖关系。 ３讨论 ＡＩ３的沉积可引起脑实质损伤，神经元是其攻击的重要靶 点，影响最明显的是海马等与智能相关的部分，从而引起学习 记忆的障碍 引。本研究对已造成的ＡＤ大鼠模型，进行ＭＴ的 ｆｏｒｗａｒｄ）循环 ｊ，即ｃａ“加速自由基的生成。或反过来，自由基 增加胞内钙离子的堆积。Ｓｔａｎｋｏｖ等研究发现ＡＤ鼠存在有海 马ｃａ“含量的增高 ，细胞内ｃａ“浓度增加是导致细胞死亡 和凋亡的共同途径，本研究已证实此点，同时也证明ＭＴ可明 显抑制ＡＤ大鼠海马ｃａ“含量的增高，且呈剂量依赖关系。 （２）Ａｐ的沉积还可诱发氧化过程中有关酶类的异常表达，ＮＯ 是一种神经递质，在神经发育和衰老过程中起重要作用，但若 合成和释放过多，则会诱发细胞毒作用，引起神经元凋亡或死 亡。Ｔｅｎｎａ等研究显示，ＡＤ大鼠海马内，ＮＯ合成的关键酶一氧 化氮合酶（ＮＯＳ）的活性明显高于正常脑组织¨】，这也与本实验 的研究结果相符，同时也显示ＭＴ可明显降低ＡＤ大鼠海马阳 性细胞的个数，抑制ＮＯＳ在海马神经元的表达，且呈剂量依赖 关系。 总之，ＭＴ对ＡＤ大鼠的学习记忆能力有明显的干预作用。 这种作用可能与ＭＴ对ＡＤ大鼠海马神经元的保护、抑制海马 ｃａ“含量及ＮＯＳ的表达有关，但具体机制还有待进一步探讨。 ４参考文献 １ Ｐｅｔｅｒｓｅｎ ＲＣ，Ｄｏｏｄｙ Ｒ，Ｋｕｒｚ Ａ，ｅｔ ｏ２．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｉｎ ｍｉｌｄ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｎｅｕｒｏｌ，２０００；５８（１０）：１９８５－９２． ２张癸荣，高登莲，殷明．对抗Ｂ一淀粉样蛋白神经毒性药物治疗阿 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