Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 中国兽医杂志２０１３年（第４９卷）第６期 ７５ 不同制剂工艺对鱼腥草有效成分含量及药效的影响 何书海 （信阳农业高等专科学校动物科学系，河南信阳４６４０００） 摘要：为探讨传统中药煎剂与免煎颗粒剂有效成分和药理效应上的差异，本研究利用回流提取（浓缩）机组制备了鱼腥草 原药浓缩液，同时利用喷雾干燥机将部分原药浓缩液制备成了于粉；并对鱼腥草两种不同剂型中槲皮素的含量进行测定和二 者体外抑菌效果的观察。通过试验发现，鱼腥草原药浓缩液与喷雾干燥粉中的槲皮素含量无统计学上的差异，而在体外抑菌 试验中，鱼腥草原药浓缩液对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度均低于喷雾干燥粉。 关键词：鱼腥草；制备工艺；免煎剂；槲皮素；抑菌试验 中图分类号：Ｓ８５９．７９ 文献标识码：Ａ 文章编号：０５２９ ６００５（２０１３）０６～００７５—０３ Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄ Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｆｒｏｍ Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ Ｐｒｏｃｅｓｓ ＨＥ Ｓｈｕ—ｈａｉ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｘｉｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ，ＸｉｎＹａｎｇ ４６４０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｒｅｅ ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ ｇｒａｎｕｌｅｓ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｆｒｏｍ Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ ａｓ ｔｈｅ ｉｎｄｅｘ．Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｈａｖｅ ｕｓｅｄ ｔｈｅ ｒｅｆｌｕｘ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）ｐｌａｎｔ ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ｌｉｑｕｉｄ ｆｒｏ ｍ Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ ａｎｄ ｈａｖｅ ｕｓｅｄ ｔｈｅ ｓｔｒｅａｍ ｓｐｒａｙｉｎｇ ｄｒｉｅｒ ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｔｈｅ ｐｏｗｄｅｒ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎ— ｔｒａｔｅ ｌｉｑｕｉｄ，ｔｈｅｎ ｗｅ ｈａｖｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｔｈｅ ｄｒｕｇ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ｈａｖｅ ｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅ１ ｏｆ ｓｔａｔｉｓ— ｔｉｃｓ．Ｂｕｔ ｉｎ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｗｅ ｈａｖｅ ｆｏｕｎｄ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ｌｉｑｕｉｄ ｆｒｏｍ Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ ｗａｓ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｓｐｒａｙ ｄｒｉｅｄ ｐｏｗｄｅｒ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｎｄ ｓｔａｐｈｙ１ｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ；ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｐｒｏｃｅｓｓ；ｆｒｅｅ ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｔｅｓｔ 中药以其独特的疗效依然在兽医临床上发挥着 药生产工艺对中药有效成分含量及药效的影响，根 其不可替代的作用。目前中兽药以散剂、煎剂为主， 据前期研究内容ｌ＿３］，本试验拟选用鱼腥草利用兽药 药效的发挥因剂型和采食而受到影响，配方颗 生产中式生产设备将其制备成不同剂型，同时检测 粒剂因此应运而生。配方颗粒剂又称作免煎剂，即 相关指标，以期为探讨免煎剂与传统煎剂之间的关 是将单一中药饮片经过对有效成分提取加工浓缩后 系提供科学佐证。 制成的颗粒剂，便于临床调配 ］。它是发展我国传 传统医学和现代医学均证明，鱼腥草具有抗菌、 统中医药的一种有益尝试，但中药免煎组合方剂的 清热、镇痛、镇咳、利尿之功效，在兽医临床上鱼腥草 药效作用能否与传统煎剂一致，这在学术界一直存 常用于感染性疾病的治疗。现代医学研究表明，鱼 有争议ｌ＿２］。虽然有研究对验证免煎剂的药效和质量 腥草的主要活性成分为挥发油和黄酮类化合物，这 控制做了一些有益的尝试，但要最终解决争议、消除 类物质具有清热解毒、利尿通便、抗菌消炎、抗氧化、 怀疑依然任重而道远；因此对中药材的不同剂型与 消除体内自由基等药理作用 ］，而槲皮素是黄酮类 免煎颗粒剂进行有效成分含量及药效进行观察比较 化合物的代表之一。结合本试验为探讨免煎剂与传 将是一个有效的手段。为了更加客观真实地观察兽 统煎剂之间关系的目的，本试验拟检测不同剂型鱼 腥草中槲皮素含量，同时观察不同制剂鱼腥草的体 收稿日期：２Ｏ１１ １０—１７ 基金项目：教育部高职高专动物生产类专业教指委２００９年度立 外抑菌效果。类似研究尚未见报道。 项项目（ＤＪＺＷ０９１１７） １材料与方法 作者简介：何书海（１９７９一），男，硕士，讲师，从事中兽医药与免 １．１ 药物 鱼腥草干草（鱼腥草洗净６０℃烘箱干 疫病理研究，Ｅ ｍａｉｌ：ＣＯＣＯ．ｅ２００８＠１６３．ｃｏｒｎ 燥２ ｈ左右至恒重），槲皮素标准样品（分析纯，Ｓｉｇ－ ７６ 中国兽医杂志２０１３年（第４９卷）第６期 ｍａ公司提供），其余药品均为分析纯。 １．２菌种与培养基大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡 萄球菌（本校微生物实验室提供）；葡萄糖酚红肉汤 （普通液体培养基含葡萄糖１ 、酚红０．００２ ９／６）。 １．３ 仪器 ＤＣ＿ＮＳＧ型实验型提取浓缩机组（上海 达程实验设备有限公司）；Ｉ）Ｃ－１５００型实验型喷雾干 燥机（上海达程实验设备有限公司）；ＴＵ一１８１０型紫 外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公 司）；ＪＡ２１０３Ｎ电子天平，ＴＧＬ－１６Ｇ高速离心机（上 海安亭科学仪器厂）。 １．４鱼腥草不同制剂的制备 １．４．１制取工艺 （１）参照相关文献［５］和预试验 结果，物料比选择１：１５。即取鱼腥草５ ０００ ｇ加水 ７０ ０００ ｍＬ，同时加乙醇和２５ 盐酸（体积比为 ４：１）混合提取液５ ０００ ｍＬ，置于ＤＣ—ＮＳＧ型实验 型提取（浓缩）机组中进行回流提取。提取物料温度 为９Ｏ℃，提取时间３０ ｍｉｎ；浓缩物料温度为８Ｏ℃，真 空度为０．０６ＭＰａ，浓缩至５ ０００ ｍＬ（料液比浓度为 １ ｇ／ｍＬ）备用。（２）取上述浓缩液２ ５００ ｍＬ置于 ＤＣ－１５００实验型喷雾干燥机喷雾干燥，收集全部粉 末，备用。 １．４．２样品处理及含量分析 根据槲皮素溶于乙 醇的特点，将喷雾干燥原粉用８０ 乙醇稀释，定容 至２ ５００ ｍＬ；再分别量取鱼腥草浓缩原液（简称“原 药浓缩液”）和喷雾干燥粉醇溶液（简称“干粉醇溶 液”）１０．０ ｍＬ置于１５ ｍＬ离心管中，在１０ ０００ ｒ／ ｍｉｎ条件下离心１０ ｍｉｎ，移取上清液作为供试品溶 液。 １．５槲皮素标准曲线的制定 精密称取槲皮素标 准品１０．０００ ｍｇ，置１０ ｍＬ容量瓶中，加８Ｏ 乙醇 溶解并定容，制成浓度为１ ｍｇ／ｍＬ的储备液。以此 储备液为参比液在２００～５００ ｎｌＴｌ范围用紫外可见 分光光度计扫描，选择适宜波长。分别量取储备液 ０．０、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５ ｍＬ于１０ ｍＬ 容量瓶中，８Ｏ 乙醇定容、摇匀，配制成质量浓度分 别为０．Ｏ０、０．０５、０．１０、０．１５、０．２０、０．２５、０．３０、０．３５ ｍｇ／ｍＬ的溶液，在适宜波长处测定吸收度，绘制标 准曲线，计算回归方程。 １．６不同制剂中槲皮素含量测定 将上述供试液 分别置于ＴＵ－１８１０型紫外可见分光光度计中，选择 适宜波长测定供试品的吸光度；由回归方程计算出 不同样品中的槲皮素含量。 １．７鱼腥草不同制剂最小抑菌浓度（ＭＩＣ）测定 按《中国兽药典》规定，鱼腥草体外抑菌试验浓度为 １ ｇ／ｍＬ。分别取原药浓缩液（原药浓缩液组）和干 粉水溶液（干粉水溶液组）分别对大肠杆菌、沙门菌、 链球菌进行最小抑菌浓度的测定，每种细菌３个重 复。在无菌条件下，将上述各药液分别用葡萄糖酚 红肉汤作管外梯度稀释，每种菌的１～９号管，药物 的稀释浓度分别为１：５，１：１０，１：２Ｏ，１：４０， １：８Ｏ，１：１６０，１：３２０，１：６４０，１：１ ２８０，第１０号 管不加药物作为对照，每管药液均为１ ｍｌ ，每管菌 量均为０．１ ｍＬ，混合均匀，３７℃培养２４ ｈ，取出观察 细菌生长，对照管液体为红色，细菌生长管为黄色。 无细菌生长的最低药物浓度即为对该菌株的最低抑 菌浓度（ＭＩＣ）。 ２ 结果 ２．１ 检测波长的确定 以８０ 乙醇溶液为参比 液，将槲皮素标准储备溶液在２００～５００ ｎｍ波长范 围内扫描，得到其最大吸收波长分别位于２５６ ｎｍ 和３６２ ｎｍ附近。结合前人研究结果 ］，本试验采 用３６２ ｎｍ为测定波长对鱼腥草的槲皮素含量进行 测定。 ２．２槲皮素的标准曲线 以浓度（Ｃ）对吸光度（Ａ） 作标准曲线，并且进行线性回归分析，结果表明，槲 皮素标准溶液在浓度与吸光度之间呈现良好的线性 ０ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ 关系。经回归处理得方程：Ｃ一１０．９７７０Ａ ０．００６２ ∞ ∞ 加：２ ０ （Ｃ—ｍｇ／ｍＬ），决定系数ｒ 一０．９９２４。（图１）。 ＾ 毫 訾 毫 Ｏ 吸光度（￣－－３６２ｒｉｍ） 图１槲皮素标准曲线与回归方程 ２．３不同制剂中槲皮素的含量如表１所示，通过 紫外分析不同制剂中槲皮素的吸光值，结果表明，鱼 腥草原药浓缩液中槲皮素的平均吸光度为０．２５３ ７ （ 一３６２ ｎｍ），干粉乙醇稀释液中槲皮素的平均吸 光度为０．２４６ １（ 一３６２ ｎｍ）。经过回归方程计算， 原药浓缩液中的槲皮素含量为２．７７８ ７ ｍｇ／ｍＬ，干 粉乙醇稀释液中槲皮素的含量为２．６９５ ２ ｍｇ／ｍＬ； 两组数值在统计学上无显著差异。 表１不同制剂中槲皮素吸光度值 删 二 札’ 重复１重复２重复３重复４重复５ 均值 土Ｓ 原药浓缩液０．２５３６ ０．２５３７ ０．２５３７ ０．２５３６ ０．２５３７ ０．２５３７ ２．７７８７ 干粉醇溶液０．２４６１ ０．２４６０ ０．２４６１ ０．２４６１ ０．２４６０ ０．２４６１ ２．６９５２ ２．４不同制剂鱼腥草抑菌效果 如表２所示，试验 结果表明，鱼腥草原药浓缩液对大肠杆菌、沙门菌和 金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为１２．５ ｒａｇ／ 中国兽医杂志２０１３年（第４９卷）第６期 ７７ ｍＬ、６．２５ ｍｇ／ｍＬ、３．１２ ｍｇ／ｍＩ ，３次重复试验显 ｍｇ／ｍＬ、６．２５ ｍｇ／ｍＬ，其中对沙门菌抑菌试验时， 示，在此浓度下抑菌效果有效率达到１００ ；鱼腥草 在相应浓度下的３次重复试验中２次有效。对其余 干粉乙醇稀释液对大肠埃希氏菌、沙门菌和金黄色 两种细菌的抑菌能力为１００ 。 葡萄球菌的最小抑菌浓度为２５．０ ｍｇ／ｍＬ、６．２５ 表２鱼腥草不同制剂抑菌效果 （ｎ一３） 十：单次试验中结果有效；一：无效 ３讨论 提取率为指标，对麻黄、甘草、苦杏仁等进行了配方 本试验利用实验型回流提取（浓缩）机组对鱼腥 免煎剂的制备工艺和质量控制研究，结果表明，以这 草进行了提取和浓缩，同时利用喷雾干燥机对浓缩 些药材制成配方颗粒免煎剂在工艺上是可行的，并 液制备成了干粉；该中试生产线型的提取（浓缩）及 以其有效成分作为质量控制指标是合理的＿１ “］。陈 干燥设备将更客观真实地观察生产设备及制备工艺 黎等采用薄层色谱法和高效液相色谱法对牛蒡子、 对中药有效成分及药效的影响。吴景林 ］、罗显 炒牛蒡子及其免煎剂中主要成分牛蒡苷进行鉴别及 华 等曾分别采取了索氏提取器回流提取、超声波 含量测定，结果显示，牛蒡子生品与炮制品中牛蒡苷 提取和简单煎煮法对鱼腥草槲皮素的提取工艺进行 的含量均符合药典限度要求，免煎剂中牛蒡苷含量 了研究，对于利用回流浓缩机组提取鱼腥草有效成 仅为炮制品中的三分之一 。苏鑫等研究了保元 分的研究尚未见报道。本试验通过对两种鱼腥草制 汤不同调剂形式对脾虚小鼠负重游泳及Ｍ 吞噬 剂中槲皮素有效含量的测定，结果显示，两种制剂工 功能的影响，结果发现，保元汤的传统煎剂和免煎剂 艺对槲皮素含量的影响在统计学上无明显差异，但 均对小鼠的免疫功能有一定的提高作用，而传统煎 是从吸光度数值上观察到鱼腥草干粉醇溶液的吸光 剂的疗效更为明显Ⅲ１ 。虽然部分免煎中药颗粒的 度对比原药浓缩液有一定程度的降低。这可能是由 疗效与传统饮片相近甚至效果更好，但不能肯定所 于在喷雾干燥制粉中，制备工艺使部分槲皮素的含 有的配方临床疗效都等同于传统的中药煎剂。本试 量减少，从而影响了吸光度。 验以单味中药鱼腥草进行了有效成分含量的测定和 有文献表明［８－９］，鱼腥草合成制剂以及鱼腥草注 药效的观察，结果显示，经喷雾干燥后的鱼腥草干粉 射液的体外抑菌能力很强，其中对溶血性链球菌、金 对３种细菌的体外抑菌能力较原药浓缩液要低；任 黄色葡萄球菌等有明显的抑制作用；对大肠埃希氏 非等通过对比１０种中药饮片和４种方剂的煎剂与 菌、痢疾杆菌等也有作用。本研究利用所制取的鱼 免煎颗粒剂的抑菌作用发现，免煎颗粒剂的抑菌作 腥草原药浓缩液和干粉醇溶液对大肠杆菌、沙门菌、 用弱于煎剂 ］，与本研究有相似的结论。“群药共 金黄色葡萄球菌进行抑菌试验，以期获得不同制剂 煎”是中药的主要特色，从理论上讲，中药复方药理 鱼腥草的最小抑菌浓度。结果显示，原来浓缩液对 作用并非等同于单味中药成分提取后的简单混合； 上述３种细菌的最小抑菌浓度均低于干粉醇溶液。 多味药物在高温“共煎”之时会产生各种物理及化学 鱼腥草有效成分主要包括挥发油和黄酮类，挥发油 变化，煎出成分较为复杂＿】 。这些成分通过“君臣 内抗菌有效成分主要包括癸酰乙醛、月桂醛、蒎烯 佐使”的关系发挥增强疗效、缓和药性的作用，这是 和芳樟醇等，在利用蒸汽式喷雾干燥机对鱼腥草浓 免煎剂是无法做到的，因此免煎剂单味药之和的药 缩液干燥时，使得大量的挥发油随高温蒸汽从排气 理效应能否等同于传统中药煎剂，还有待进一步研 口逸散，因此影响了鱼腥草的抑菌效果。 究。 本试验结果表明，在制备中药免煎剂时制备工 参考文献： 艺对药物含量及药效均有不同程度的影响。虽然中 ［１］张惠，胡敏．中药配方颗粒剂的临床应用评价［Ｊ］．西部医学， 药免煎颗粒剂替代煎剂是发展我国传统中医药的一 ２Ｏ１１，２３（７）：１３５５—１３５８． 种积极尝试，但我国目前尚没有统一的质量控制标 ［２］ 张凌云，于玉涛．免煎中药的利与弊探讨［Ｊ］．中国医院药学杂 志，２００９，２９（６）：４９８—４９９． 准，所以质量控制研究是中药免煎颗粒剂在兽医临 ［３］何书海，易先国，丁秀红．鱼腥草煎剂对雏鸡试验性大肠埃希 床进一步推广应用的基础。姜泓等以药材有效成分 氏菌病的防治作用ｒＪ＿．西北农、Ｉ 学报，２０１１，２０（６）：５９—６ｌ＿ ７８ 中国兽医杂志２０１ ３年（第４９卷）第６期 绵羊瘁狙的诊断 ｈ。结果由小肠内容物分离出２株产气荚膜梭菌。 此菌在鲜血琼脂平板上形成表面光滑、隆起、半透明 张西云，胡国元，李生庆，范玉霞， 的菌落，外围有透明溶血环，其在厌气肝汤中４ ｈ开 李志宁，王亭亭，黄 荣 始生长、产气，培养液混浊，４８ ｈ后菌体沉淀于管 （青海省畜牧兽医科学院兽医研究所，西宁８１０００６） 底，上部清澈。涂片镜检可见革兰染色阳性、中等大 小的大杆菌。 １流行及发病情况 ３．４ 动物试验 两株菌的培养物上清液分别以 ２０１１年１０月份以来，祁连县央隆乡托勒村三 ０．２ ｍＬ／只的剂量，静脉注射两只小鼠，均在２ ｍｉｎ 社２５＿户牧民母羊群发生以小肠出血、胆囊肿大为特 内死亡，以不同浓度稀释后静脉注射小鼠，测定其最 征的高致死性疫病，１个月内共发病９６只，死亡９４ 小致死量。结果：２株菌的最小致死量分别为５００ 只，致死率为９７．９２ ，造成了较大的经济损失。此 ＭＬＤ／ｍＬ（４ｘ鼠静脉注射）和２００ ＭＬＤ／ｍＬ（小鼠静 起疫病病程为２～４ ｄ，经用抗生素治疗后２只存活。 脉注射）。 该羊群６月份曾全群注射三联苗（快疫、瘁狙、肠毒 ３．５ 中和试验 取上清液１ ｍＬ分别与等量Ｃ型 血症）。 和Ｄ型魏氏梭菌定型血清混合，放于３７℃恒温箱内 此次发病均为２岁以上成年母羊，２岁以下母 中和５０ ｍｉｎ，分别静脉注射２只小鼠（每只０．４ 羊和羯羊未见发病；发病区域仅限于冬季草场、高山 ｍＬ）。结果Ｄ型血清中和组小鼠在１８ ｍｉｎ内死亡， 草场，其他村社未见发病。２５户牧民存栏羊１２ ０００ Ｃ型血清中和组小鼠健活，表明分离菌为Ｃ型产气 只，发病率为０．８ 。病羊曾用庆大霉素、消炎利胆 荚膜梭菌。 片、油剂青霉素、土霉素、磺胺类药物治疗，效果不明 ４结果 显。环丙沙星类抗生素有一定疗效，但大部分仍然 根据临床和实验室检验，证明该地区绵羊所发 死亡。 生的急性死亡为绵羊瘁狙。 ２症状及剖检变化 ５讨论 发病初期体温３９℃～４Ｏ．３℃，排黑绿色稀粪， ５．１从病死羊肠内容物分离出了Ｃ型产气荚膜梭 食欲废绝，喜食雪，精神不振、卧地不起，病程１～２ 菌，证明该地区此次发生在绵羊的急性死亡是绵羊 ｄ，有的可达１０ ｄ，有腹痛症状，发病母羊多数流产。 瘁狙。 皮下出血，小肠充气、出血，胆囊肿大（正常的８～１０ ５．２ 采取病料后应及时检验，因为肠内细菌极 倍），腹腔恶臭，其他脏器无明显变化。 易死亡，检菌时应将肠内容物直接接种鲜血平 ３细菌检查 板，培养４８ ｈ。挑菌时应挑选３～５个不同形态 ３．１脏器触片分别取病死羊的心、肝、脾、肺及肾 的菌落，分别测毒，因为引发绵羊瘁狙的产气荚 触片，瑞氏染色、镜检，均未见到任何细菌。 膜梭菌菌株之间生长特性和产毒特性均有较大 ３．２脏器培养分别取病死羊的心、肝、脾、肺及肾 差别。 接种于鲜血斜面和厌气肝汤中，３７℃培养２４ ｈ，结 ５．３产气荚膜梭菌是土壤常在菌，秋季气温多变， 果心、肝、脾、肺及肾均无细菌生长。 多雨潮湿，加之转群奔波可能造成绵羊体质降低而 ３．３小肠内容物培养取病死羊的小肠内容物（血 诱发本病。适时免疫接种羊三联或四联疫苗，尤其 水）划线接种于葡萄糖鲜血琼脂平皿，３７。Ｃ厌气培养 绵羊转群或进入换季草场之前，加强免疫接种是预 ４８ ｈ，挑选可疑菌落，接种于厌气肝汤３７℃培养２４ 防本病发生最为可行的方法。 ［４］南京中医药大学．中药大辞典［Ｍ］．上海：上海科学技术出版， ［１Ｏ］姜泓，孟舒，陈再必．白芍配方颗粒制备工艺和质量标准研究 ２００６：２７８． 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