２０妻１年月３ 冀６坦 Ｃｈ中国化工贸易 ｉｎａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｒｌａｄｅ Ａｌｃａｌａｓｅ水解大豆蛋白的研究 李冰王景林 １ １０１４２） ｆ沈阳燃气有限公司。辽宁沈阳研究开发 摘要：为了解决许多大豆蛋白酶解工艺中，需加碱维持体系的ｐＨ值以得到高的水解度，最终会生成大量的盐，而脱盐又是一个高能耗的步 Ａｌｃａｌａｓｅ酶解 骤，对酶解进行研究，提出了用碱性蛋白酶Ａｌｃａｌａｓｅ和黑曲霉酸性蛋白酶协同水解大豆蛋白的方法。 关键词：大豆蛋白一、实验原理 水解蛋白质的反应式。大豆蛋白原料组成：蛋白质含量为９１％； 水分含量的测定采用常压直接干燥法，测得水分含量为７．３ｓ％。 ｐＨ值８．０。在ｐＨ值为８．０的条件下水解大豆蛋白时，水解度随着温度 值的增大先升后降，即存在着最佳的温度，温度为７Ｏ℃时水解度最高。 ２．３酶与底物比对大豆蛋白水解度的影响 水解条件：水解温度６０ｏＣ；底物浓度６０ｇ／Ｌ；水解时间２ｈ；ｐＨ 值８．０。随着酶与底物比的增加，水解度呈上升趋势，但是当酶与底物 比达到４０以后，再增加酶与底物比水解度的增加不是非常显著，这可 能是因为酶与底物比高于４０ ／ｇ以后酶在底物表面的吸附作用己达 到饱和。故我们选择酶与底物比为４０ 止／ｇ。 底物浓度对大豆蛋白水解率的影响。水解条件：水解温度６（）℃； 酶与底物比６０，ｐＨ值８．０；水解时间２ｈ。由图３—４可以看出，在较 低的底物浓度时，随着底物浓度增加，蛋白质水解度逐渐增大，但底 物浓度增加到一定程度后再继续增加，水解度下降，故Ａｌｃａｌａｓｅ水解 大豆蛋白的最适反应物浓度为５０ｇ／Ｌ。 ３．正交试验确定大豆蛋白的最佳水解条件 考虑到各因素的相互依赖和相互制约，导致对酶解效果的影响， 进行正交试验以确定各参数的最佳组合。按正交表Ｌ （３ ）设计试验，以 水解度测定指标，来考查４个因素对水解效果的影响，水解时间为２ｈ。 从正交试验得到的最佳水解条件为：底物浓度５０ｇ／Ｌ，水解温度 ７０℃，酶与底物比６Ｏ ／ｇ，ｐＨ值８．０。 在４个因素的极差值中，对于水解度与底物比最大，底物浓度其 次，ｐＨ值最小，４个因素对水解度影响的大小顺序为：Ｃ＞Ｄ＞Ａ＞Ｂ， 二、Ａｌｃａｌａｓｅ水解大豆蛋白 １．酶解反应 步骤如下：（１）将大豆蛋白在１０５℃下干燥至恒重，称取一定量上 述原料加入反应釜，按照设计的底物浓度向反应釜中补充适量水。（２） 连接反应釜和超级恒温水浴，然后启动磁力搅拌器和超级恒温水浴， 使温度为控制温度下。（３）在反应釜上安装ｐＨ计电极，在搅拌下以一 定方式加入蛋白酶进行水解。（４）在反应过程中不断进行搅拌，并滴加 ２ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ维持ｐＨ值不变。（ｓ）水解结束后，水解液经过高温灭活 （９ｓ℃下加热５ｍｉｎ），在４０００ｒ／ｍｉｎ的条件下离心１０ｍｉｎ，取适量上清 液供分析用。 酶解效果评价：采用大豆蛋白的水解度指标评价酶水解效果，大 豆蛋白水解度（ＨＤ）的测定是描述蛋白质水解程度的一个非常重要的 量。测得的蛋白质相应含量就可以计算出ｌ克水解大豆蛋白样相应的 ＨＤ值： ＨＤ＝［０．０１×Ｖ／（３ ｘ Ｏ．１）一０．３３］／７．８ ２．ｐＨ值定测 利用仪器校正后测量，将每组测取三个数据取平均值。 三、结果与讨论 １．大豆蛋白的酶解 酶解蛋白质通常是在维持体系ｐＨ值不变条件下进行的。蛋白质 在酶解的过程中ｐＨ值一般呈明显的下降趋势，其根本原因是肽键打 开后羧基的酸性造成的，可通过向水解液中加ＮａＯＨ溶液维持ｐＨ值 不变。 ２．单因素水解条件的考察 ２．１ｐＨ值对水解度的影响 即酶加入量＞底物浓度＞温度＞ｐＨ； ４．水解时间考查 影响酶解蛋白水解程度的另一重要因素为反应时间，在以上最佳 水解条件下，考察了大豆蛋白水解度随时间的变化情况。随着水解时 间的延长，水解度不断增加，但当水解时间为４ｈ后，再延长水解时间， 水解度增加较陧，所以水解时间可取为４ｈ，此时水解度达到２４．６％。 四、结论 本实验是以大豆分离蛋白为原料，以Ａｌｃａｌａｓｅ水解大豆分离蛋白， 水解条件：酶与底物比４５ ／ｇ；底物浓度６０ｇ／Ｌ；水解时间２ｈ； 温度６０℃。实验结果如图３—１所示。由图３—１可以看出，水解度随着 ｐＨ值的增大先升后降，即存在着最佳的ｐＨ值，ｐＨ值为８．０时水解 度最高。 ２，２温度对大豆蛋白水解度的影响 水解条件：酶与底物比７５ ／ｇ；底物浓度６０ｇ／Ｌ；水解时间２ｈ； 研究了水解大豆蛋白制备大豆蛋白寡肽时影响水解效果的各种因素： 蛋白液的浓度、水解的温度、水解时间、酶的加入量及ｐＨ值。在此 基础上通过正交试验确定了最佳水解条件：温度７Ｏ℃，底物浓度 ５０ｇ／Ｌ，酶与底物比为６０ Ｌ／ｇ，ｐＨ８．０，水解时间为４ｈ。在此水解条 件下，水解液水解度达到了２４．６％。 上接第１９４页 ４．１０．１对燃油速闭阀进行关断试验； ４．１０．２对燃油泵、风机、被保护处所的一切开口做关停试验。 ４．１ ｌ危险区及其通风检验 ４．１ １．１检查危险区的范围是否有所改变，是否增加了临时的遮蔽、 房间和其他设备； ４．１１．２检查围蔽危险处所气密门及气锁间； ４．１１．３检查危险区内的动力通风并做风机故障报警试验； ４．¨．４检查相邻的正压通风和负压通风区的压差； ４．１３．２对认可的有火压力容器进行下列检验： ４．１３．２．１对高温报警和停止装置进行试验； ４．１３．２．２对阻火器、火星消除器进行检查； ４．１３．２．３对火焰故障探测、燃路上的高低压传感器、通风流量 或压力低传感器进行报警及关断试验。 ５通信 ５ ｌ通信设备的效用试验； ５．２无线电通信设备备用电源的可靠性及容量检查； ４．１ １．５对气锁间做失压报警试验。 ４．１２可燃气体探测系统检验 ４．１２．１用样气做报警及关断动作试验； ４．１２．２检查控制板的技术状况； ４．１２．３检查手提探测器的数量及技术状态。 ４．１３适宜危险区的设备检验 ４．１３．１防爆电气设备及电缆检验； ５．３各种专用标志及信号的完整性检查； ５．４信号灯及其故障报警装置效用试验。 ６．人员健康与保护： ６．１医疗室医疗设备舀己备及技术状况； ６．２噪声、振动测量； ６．３栏杆、扶手、护笼、运动部件及高低温表面防护检查。 ＷＷＷ ｃｈｅｆ７ ￣ｍｅ｛Ｊｉａ ｃｏｆｆ￣ Ｇｎ审 亿 ： 誊总嘲 Ｃｔ ｌ 秘ｅｈｅｍ；。箍｛Ｔｒａｄｅ Ｉ中国化工贸易Ｉ ２３１
