现代药物与临床 Drugs & Clinic 第30卷 第6期 2015年6月 ·663·
HPLC法测定依维莫司原料药中依维莫司
孙莉君1，沈海梅2，马海霞1，董大伟1，王 越1，杨 静1
1. 大庆市人民医院，黑龙江 大庆 163316
2. 哈尔滨莱博通药业有限公司，黑龙江 哈尔滨 150025
摘 要：目的 建立HPLC法测定依维莫司原料药中依维莫司。方法 采用Hypersil-ODS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈–水（70∶30）；检测波长：276 nm；柱温：50 ℃；体积流量：0.8 mL/min；进样量：10 μL。结果 依维莫司在63～1 008 μg/mL线性关系良好（r＝0.999 7），平均回收率为100.45%，RSD值为0.%（n＝9）。结论 所建立的操作简便，专属性强，可用于依维莫司原料药的质量控制。 关键词：依维莫司原料药；依维莫司；高效液相色谱
中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1674 - 5515(2015)06 - 0663 - 03 DOI: 10.7501/j.issn.1674-5515.2015.06.012
Determination of everolimus in everolimus active pharmaceutical ingredient
by HPLC
SUN Li-jun1, SHEN Hai-mei2, MA Hai-xia1, DONG Da-wei1, WANG Yue1, YANG Jing1
1. Department of Pharmacy, Daqing People’s Hospital, Daqing 163316, China 2. Harbin Laiboten Pharmaceutical Co., Ltd, Harbin 150025, China
Abstract: Objective To establish an HPLC method for determination of everolimus in everolimus active pharmaceutical ingredient. Methods The separation was performed on a Hypersil-ODS C18 column with acetonitrile - water (70∶30) as mobile phases. The detection wavelength was set at 276 nm. The column temperature was 50 ℃. The flow rate was 0.8 mL/min with injection volume of 10 μL. Results Everolimus had good linearity in the ranges of 63 — 1 008 μg/mL (r＝ 0.999 7). The average recovery was 100.45% with RSD 0.% (n=9). Conclusion The method is simple and specific, and can be used effectively for quality control of everolimus active pharmaceutical ingredient.
Key words: everolimus active pharmaceutical ingredient; everolimus; HPLC
依维莫司是免疫抑制剂西罗莫司C42位丙酸酯类衍生物，结构式见图1。由诺华公司研发，临床上主要用于预防心脏移植和肾移植手术后的排异反应[1]。依维莫司也是一种mTOR激酶抑制剂，可阻断细胞周期从G1期到S期进程，导致癌细胞死亡，2009年FDA批准其用于治疗使用舒尼替尼或索拉非尼无效的晚期肾癌[2]。另外依维莫司还具有抑制血管内皮细胞增殖的作用，用作药物支架的涂层药物可防止冠状动脉支架植入后血管再狭窄[3]。本实验建立反相高效液相色谱法测定依维莫司原料药中依维莫司，该方法操作简便，专属性强，为依维莫司原料药的质量控制提供了准确可行的分析方法。
收稿日期：2015-02-28
作者简介：孙莉君，女，主管药师，研究方向为医院药学、药品检验。Tel: (0459)6612281 E-mail: sunlijun993@163.com
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图1 依维莫司的结构式 Fig. 1 Structure of everolimus
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1 材料 1.1 仪器
Agilent 1260高效液相色谱仪，Agilent色谱工作站；CPA225D型电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）。 1.2 药品与试剂
依维莫司原料药（武汉贝尔卡生物医药有限公司），依维莫司对照品（质量分数99%，Aladdin），甲醇（色谱纯，Fisher公司）、乙腈（色谱纯，Fisher公司），其他试剂均为分析纯，水为纯化水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件
Hypersil-ODS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈–水（70∶30）；检测波长：276 nm；柱温：50 ℃；体积流量：0.8 mL/min；进样量：10 μL。 2.2 溶液的配制
取依维莫司原料10 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，用流动相乙腈–水（70∶30）溶解并加至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取依维莫司对照品10 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，用流动相乙腈–水（70∶30）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。 2.3 专属性试验
取供试品溶液适量，分别经2 mol/mL硫酸溶液（室温放置1 h）、2 mol/L氢氧钠溶液（室温放置1 h）、10%过氧化氢溶液（室温放置1 h）、80 ℃高温1 h进行破坏。精密量取上述溶液分别注入色谱仪，记录色谱图。结果表明，依维莫司经酸、碱、氧化、高温破坏，所产生的降解产物与主成分均能完全分离，不干扰依维莫司的测定。色谱图见图2。 2.4 线性关系
称取依维莫司对照品10 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀后作为标准贮备液。分别精密量取储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0 mL，置10 mL量瓶中，并用流动相稀释至刻度。进样测定，记录色谱图。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性拟合，得回归方程为Y=32.123 X＋183.27，r＝0.999 7，结果表明，依维莫司在63～1 008 μg/mL线性关系良好。 2.5 精密度试验
取批号140528依维莫司样品，制备供试品溶
液，精密量取20 μL，重复进样6次，结果依维莫司峰面积的RSD值为0.7%。
A
*
B
*
C
*
D
*
0 10 20 30 40
t /min
*-依维莫司 *-everolimus
图2 酸破坏试验（A）、碱破坏试验（B）、氧化破坏试验（C）
和高温破坏试验（D）的HPLC图谱
Fig. 2 HPLC chromatograms of destroyed by acid (A),
destroyed by alkali (B), destroyed by oxidation (C), and destroyed by heating (D)
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2.6 稳定性试验
取批号140528依维莫司样品适量，制备供试品溶液，于室温（20～25 ℃）下放置，分别于0、2、4、6、8、10 h分别进样测定，记录主峰面积，结果依维莫司峰面积的RSD值为0.52%，说明供试品溶液在10 h内稳定性良好。 2.7 重复性试验
取批号140528依维莫司样品6份，制备供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积，计算依维莫司的质量分数，结果其RSD值为0.58%。 2.8 回收率试验
精密称取批号140528依维莫司样品40 mg，置于100 mL量瓶中，共9份，分别加入依维莫司对照品32.03、39.95、45.77 mg，制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，结果平均回收率为100.45%，RSD值为0.%（n＝9）。 2.9 样品测定
取依维莫司原料药约10 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀。再精密量取2 mL，置于10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。取上述溶液10 μL进行测另精密称取105 ℃干燥至恒定质量的依维莫司定；
对照品适量，同法测定作为对照，按外标法计算依维莫司的质量分数，结果见表1。 3 讨论
3.1 检测波长的选择
取依维莫司适量，加流动相稀释至适宜浓度，以流动相为空白样品，在190～400 nm波长进行扫描。结果依维莫司在276 nm处有最大吸收，而空白样品无吸收，故选择276 nm作为检测波长。
表1 依维莫司原料药中依维莫司的测定结果（n=3） Table 1 Determination of everolimus in everolimus active
pharmaceutical ingredient (n=3)
批 号
依维莫司/%
RSD/%
140415 99.5 0.93 140528 98.9 1.70 140607 98.5 1.30 140630 99.8 0.67 140720 99.6 0.45 140731 98.0 1.30
3.2 流动相的选择
参考同类化合物的检测方法[4]，对流动相进行筛选。根据试验结果，确定用乙腈和水为流动相，所得依维莫司峰形较好，且主峰保留时间适宜。
综上所述，本实验建立了利用高效液相色谱法测定依维莫司的方法，方法学研究表明利用该方法测定依维莫司保留时间稳定，方法精密度高，结果准确，是一种较理想的测定方法，为依维莫司质量控制标准的建立提供参考。
参考文献
[1] Motzerr J, Bacik J, Schwartz L H, et al. Prognostic
factors for survival in previously treated patients with metastatic renal cell carcinoma [J]. J Clin Oncol, 2004, 22(3): 454-463.
[2] 张 茹, 刘素娟, 秦莉伟. 雷帕霉素靶蛋白抑制剂——依
维莫司 [J]. 现代中西医结合杂志, 2010, 9(26): 3399-3401. [3] 李红杰, 胡 好, 睢大员. 第二代药物涂层支架的研究
进展 [J]. 医学, 2011, 22(11): 1001-1004.
[4] 仲伟潭, 魏增辉, 常 亮, 等. 发酵液中西罗莫司含量
的测定 [J]. 河北化工, 2009, 32(3): 68-70.
