中国康复理论与实践２０１０年４月第１ ６卷第４期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｔｈｅｏｒｙ Ｐｒａｅｔ，Ａｐｒ．２０１０，Ｖｏ１． ｝Ｉ ｏ¨４ ・ ３１１ ・ ・专题・ 霍乱毒素Ｂ亚单位一神经生长因子耦联制剂滴鼻 对拟痴呆小鼠空间学习记忆的影响 张卿 ，刘雁勇 ，白丽敏 ，石葛明。，万选才 ，孙红梅 ，左萍萍 ［摘要］ 目的观察霍乱毒素Ｂ亚单位（ｃｈｏｌｅｒａ ｔｏｘｉｎ Ｂ ｓｕｂｕｎｉｔ，ＣＢ）与神经生长因子（ＮＧＦ）耦联制剂滴鼻治疗对拟痴呆小鼠 学习记忆能力及胆碱能神经系统的影响。方法用改进的过碘酸钠法使ＣＢ－ＮＧＦ耦联，滴鼻治疗脑室内注射口样淀粉蛋白（Ａｐｚ ） 的拟ＡＤ小鼠模型；ＣＢ－ＮＧＦ ７．５／，ｇ／ｄ、１５／，ｇ／ｄ滴鼻治疗７ ｄ，Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫检测其空间学习记忆能力；免疫组织化学染色胆碱乙酰 化酶（ＣｈＡＴ）。结果未经治疗的模型鼠寻台潜伏期明显延长（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）；在安全岛所在象限的停留时间明显缩短，斜角带区ＣｈＡＴ 阳性细胞数鼍显著减少（Ｐ＜ｏ．００１）。ＮＧＦ及ＣＢ－ＮＧＦ滴鼻治疗组寻台潜伏期有所缩短，在安全岛象限内的停留时间比模型组明 显延长（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）；基底前脑斜角带区ＣｈＡＴ染色明显增多（Ｐ＜Ｏ．０１）。结论ＣＢ－ＮＧＦ滴鼻治疗可改善痴呆小鼠的空间认知能力， 与其保护胆碱能神经有关。 ［关键词］霍乱毒素Ｂ亚单位；神经生长因子；口样淀粉蛋白；Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫；胆碱乙酰转移酶 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｎａｓａｌ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｏｆ Ｃｈｏｌｅｒａ Ｔｏｘｉｎ Ｂ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ ｏｎ Ｓｐａｔｉａｌ Ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ Ｍｅｍｏｒｙ Ａ－ ｂｉｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｍｎｅｓｉｃ Ｍｉｃｅ Ｚ ＨＡＮＧ Ｑｉｎｇ，ｌ，ｌＵ Ｙａｈ—ｙｏｎｇ，ＢＡＩ Ｌｉ—ｒａｉｎ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｍｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏ，Ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＰＵＭＣ＆ＣＡＭＳ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００００５，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｊ ｕｇａｔｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｈｏｌｅｒａ ｔｏｘｉｎ Ｂ ｓｕｂｕｎｉｔ（ＣＢ）ａｎｄ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃ— ｔｏｒ（ＮＧＦ）ｏｎ ｔｈｅ ｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｃｏｎｊ ｕｇａｔｅ ｏｆ ＣＢ－ＮＧＦ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｓｏｄｉｕｍ ｍｅｔａｐｅｒｉｏｄａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｎａｓａｌｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ（Ａｐ２ ５＿３５）ｉｎｄｕｃｅｄ ａｍｎｅｓｉｃ ｍｉｃｅ ｆｏｒ ７ ｄａｙｓ ｗｉｔｈ ２ ｄｏｓａｇｅ（７．５ ｕｇ／ｄ、１５ ｕｇ／ｄ）．Ｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ ａｎｄ ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｗａｓ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｈｏｌｉｎｅ ａｃｅｔｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＣｈＡＴ）ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｅｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ ｔｅｓｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｉｎ Ａ０２¨５一ｔｒｅａｔｅｄ ｍｉｃｅ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔａｙｉｎｇ ｔｉｍｅ ｒｅｄｕｃｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓｅｄ ｆｉｒｓｔ ｑｕａｄｒａｎｔ ｗｈｅｒｅ ｔｈｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｌｏｃａｔｅｄ，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ（Ｐ＜０．０１）．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＣｈＡＴ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｎ ｄｅｃｌｉｎｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ（Ｐ＜０．００１）．ＣＢ ＮＧＦ ｎａｓａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ ｔｈｅ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ａｎｄ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｔｈｅ ｓｔａｙｉｎｇ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＣｈＡＴ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｎ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＣＢ—ＮＧＦ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｓｐａｔｉａｌ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｉｎｖｏｌｖｅ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｔｏ ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｓｙｓｔｅｍ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｈｏｌｅｒａ ｔｏｘｉｎ Ｂ ｓｕｂｕｎｉｔ；ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；８一ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ；ｃｈｏｌｉｎｅ ａｃｅｔｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ［中图分类号］Ｒ７４２ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００６—９７７１（２０１０）０４ ０３１１－０３ ［本文著录格式］张卿，刘雁勇，白丽敏，等．霍乱毒素Ｂ亚单位一神经生长因子耦联制剂滴鼻对拟痴呆小鼠空间学习记忆的影 响［Ｊ］．中国康复理论与实践，２０１０，１６（４）：３１１—３１３． 阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）以进行 性痴呆为特征的大脑退行性变性疾病。８淀粉样蛋白 （３－ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＳ）在ＡＤ脑中的沉积是ＡＤ发 出现障碍，使基底前脑的神经元缺乏神经营养作用，导 致胆碱能神经元的变性和死亡［１］。尽管ＮＧＦ是治疗 ＡＤ的首选药物 ］，但由于其分子量较大，难以通过血 脑屏障，在临床应用上受到。有研究者发现，ＮＧＦ 病的中心环节。神经生长因子（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ， ＮＧＦ）由脑内海马和皮层神经元产生。而ＡＤ患者由 滴鼻可以通过嗅黏膜上皮间隙进脑，且滴鼻给药要比 皮层、海马到基底前脑胆碱能神经元的ＮＧＦ运输 基金项目：国家８６３资助项目（２００３ＡＡ２１ ５１８１）；科技部重大新药创 制科技专项项目（２００９ＺＸ０９３０３）。 静脉给药到达脑内的浓度高得多 ］。本课题利用霍乱 毒素Ｂ亚单位（ｃｈｏｌｅｒａ ｔｏｘｉｎ Ｂ ｓｕｂｕｎｉｔ，ＣＢ）与神经细 胞膜神经节苷脂（ＧＭ１）特异性结合的特点 ］，将ＣＢ 与ＮＧＦ耦联后滴鼻治疗拟痴呆小鼠，观察对胆碱能神 经及动物空间学习记忆能力的影响。 １材料与方法 作者单位：１．中国医学科学院基础医学研究所；北京协和医学院基 础学院药理室，北京市１００００５；２．北京中医药大学解剖教研室，北京市 １０００２９；３．河北医科大学神经生物学实验室，河北石家庄市０５００１７｝４． １．１ ＣＨ＿ＮＧＦ连接 参照曾发表的过碘酸钠改良 法 Ｊ，取１．５ ｍｇ ＣＢ（Ｌｉｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）溶于 １．０ ｍｌ蒸馏水中，逐滴加入１００ ｌ新配制的０．１ ｔｏｏｌ／ Ｌ的ＮａＩＯ４，室温搅拌４０ ｍｉｎ。用０．００１ ｍｏｌ／Ｌ的醋 中国科学院上海药物研究所药理一室，上海市２０１２０３。作者简介：张卿 （１９７５一），女，山东潍坊市人，博士，助理研究员，主要研究方向：神经退行 性病的药物干预。通讯作者：左萍萍。 中国康复理论与实践２０１０年４月第１６卷第４期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｔｈｅｏｒｙ Ｐｒａｃｔ，Ａｐｔ．２０１０，Ｖｏ１．１６，Ｎｏ．４ 酸缓冲液（ｐＨ ４．４）透析过夜，在碘化的ＣＢ液中加入 ０．２ ｍｏｌ／Ｌ碳酸缓冲液１００／，１混匀。取１．５ ｍｇ ＮＧＦ （ＡＣＣＵＲＡＴＥ）溶于０．０１ ｍｏｌ／Ｌ碳酸缓冲液１ ｍｌ中， １．７数据统计分析 数据用（ ±Ｓ）表示，采用ＳＰＳＳ １１。０统计软件进行单因素（ｏｎｅ—ｗａｙ ＡＮｏＶＡ）方差分 析，组问比较采用ｏｎｅ—ｗａｙ ＡＮＯＶＡ下的ＬＳＤ，以Ｐ＜ ０．０５为有统计学差异。 ２结果 逐滴加人ＣＢ液中，用０．２ ｍｏｌ／Ｌ碳酸缓冲液调ｐＨ值 为１Ｏ，室温下搅拌３ ｈ。加入新配制的硼氢化纳溶液 １００肚ｌ，混匀，４－Ｃ放置２ ｈ。用０．０１ ｍｏｌ／Ｌ的ＰＢＳ ２．１ Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验 训练第３天对照组小鼠寻 （ｐＨ ７．１）透析过夜。透析后的液体加到ＳｅｐａｄｅｘＧ一２５ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ），用０．０１ ｍｏｌ／Ｌ的ＰＢＳ（ｐＨ ７．１）洗脱，收 集第一峰，在２８０ ｎｍ处测ＯＤ值。用蔗糖浓缩至１．０ ｍｌ。 １．２实验动物雄性ＢＡＩ Ｂ／ｃ小鼠，１８～２Ｂ ｇ，由中国 医学科学院动物研究所提供。明暗光照１２ ｈ：１２ ｈ， 自由进食饮水。 １．３ ＡＪ３ 的聚集老化无菌操作下用无菌生理盐水 溶解，浓度为１ ｍｇ／ｍｌ，３７。Ｃ孵箱内孵育７２ ｈ。 １．４模型建立与分组 小鼠用０．６ 戊巴比妥钠麻 醉，消毒后剪开头部皮肤，根据脑区定位右侧侧脑室注 射凝集态Ａ 。 （Ｓ１ＧＭＡ），每只３ １，注射１ ｒａｉｎ，停针 ３０ Ｓ后将微量进样器拔出，消毒后缝合皮肤。常对照 组注射等量无菌生理盐水。在制备模型后的第４天， 将脑内注射ＡＪ３。 的小鼠分为：模型组（ＮＳ）、ＮＧＦ组 （７．５／￣ｇ／ｄ）、ＣＢ—ＮＧＦ高剂量组（ＣＢ—ＮＧＦ—Ｈ，１５／ａｇ／ ｄ）和ＣＢ—ＮＧＦ低剂量组（ＣＢ—ＮＧＦ—Ｌ，７．５￣ｇ／ｄ）。每 组１Ｏ只，滴鼻给药，每个鼻孔滴入５ １，共１Ｏ ｌ，给药 １周。 １．５ Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验该装置包括一圆型迷宫（直 径８０ ｃｍ）、安全岛（直径７ ｃｍ）和监测仪。迷宫中注入 清水，水面高出安全岛表面１ ＣＩＩ１，水温控制在（２２±２） ℃。把安全岛所在象限记作第一象限，并在其他３个 象限标定小鼠入水点。小鼠在圆型迷宫中的运动情况 可通过监测仪进行全程跟踪监测，小鼠在６０ Ｓ内找到 安全岛，以实际时间算作潜伏期，若找不到则以６０ Ｓ 作为潜伏期。在给药治疗的第４天开始训练小鼠，每 天２次，每次６０ Ｓ，以第二、三、四象限轮流作为入水 点。若小鼠在６０ Ｓ内找到安全岛，让其在安全岛上停 留１０ Ｓ；若动物在６０ Ｓ内未找到安全岛，将动物牵引到 岛上停留１０ Ｓ。实验结果以小鼠每天寻找安全岛潜伏 期的２次平均值表示。在给药第７天撤出安全岛，测 定小鼠６０ Ｓ内在第一象限的停留时间。 １．６ ＣｈＡＴ免疫组织化学染色 脑组织石蜡切片脱 石腊，在０．３ Ｈ。Ｏ。，３７ Ｃ孵育３０ ｒａｉｎ，蒸馏水洗。在 ５ 羊血清０．３ ＴｒｉｔｏｎＸ一１００ ＰＢＳ液体中，室温封闭 ２ ｈ。加兔抗ＣｈＡＴ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，１：２００），４｜Ｃ，过夜。 ＰＢＳ洗３次。加生物素化羊抗兔ＩｇＧ（１：ｉ００），室温２ ｈ。ＰＢＳ洗３次。加辣根酶标记链亲合素（１：１００），室 温２ ｈ。ＰＢＳ洗３次。ＤＡＢ显色。 找安全岛的潜伏期明显缩短，模型组的寻台潜伏期明 显长于对照组（Ｐ＜０．０１），见表１。ＮＧＦ组与模型组 比较明显缩短（Ｐ＜０．０５），ＣＢ—ＮＧＦ低剂量组和ＣＢ— ＮＧＦ高剂量组与模型组比较，寻台潜伏期亦明显缩短 （Ｐ＜Ｏ．０１）。给药第７天（造模第１０天），把安全岛撤 走，测定小鼠６０ Ｓ内在第一象限即安全岛所在象限的 停留时间。发现模型组小鼠在第一象限的停留时间降 低，与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５），ＮＧＦ组有 明显延长（Ｐ＜０．０５）；ＣＢ—ＮＧＦ低剂量组与高剂量组 小鼠的停留时间与模型组相比亦明显延长（Ｐ＜ ０．０１） 表１各组小鼠行为学指标与基底前脑斜角 带ＣｈＡＴ阳性神经元数量（ｎ＝１０） 注：与对照组比较，ａ：』 ＜０．０１，ｂ：Ｐｄ０．０５，ｃ：尸ＧＯ．ｏｏ１；与模型组比较，ｄ： 尸ＧＯ．０５，ｅ：ＰＧＯ．ｏ１。 ２．２基底前脑斜角带区ＣｈＡＴ免疫组织化学染色 对照组斜角带区胆碱能神经元胞体饱满，染色较深。 模型组染色明显变浅，阳性细胞数显著减少（Ｐ＜ ０．００１）。而ＣＢ－ＮＧＦ滴鼻治疗后，斜角带区的胆碱能 神经元胞体染色恢复到正常，ＣｈＡＴ阳性细胞染色明 显增多（Ｐ＜０．０１）。见后插彩图２．１～图２．５。提示 ＮＧＦ已经到达此区域，并发挥作用。 ３讨论 本实验我们选用侧脑室注射ＡＪ３ 制作拟痴呆模 型。可溶性Ａ８２５ 没有毒性，而体外孵育老化形成寡 聚体聚集物，产生毒性作用 ］。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫行为学 实验的结果显示，在造模第９天，模型组的逃逸潜伏期 明显长于对照组，说明侧脑室注射ＡＪ３ 后导致小鼠 的空间学习记忆能力下降，这与ＡＪ３阻碍由斜角带投 射到海马区域的纤维释放乙酰胆碱有关。注射ＡＪ３ｚｓ Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫行为学实验结果显示，在给药第６天， ＣＢ—ＮＧＦ组和ＮＧＦ组的逃逸潜伏期较模型组缩短，而 明ＣＢ—ＮＧＦ和ＮＧＦ滴鼻给药７ ｄ都具有改善拟痴呆 后第４天经鼻腔给予ＣＢ—ＮＧＦ和ＮＧＦ，连续治疗７ ｄ，且前者寻找安全岛的时间更短，并呈剂量依赖性。说 中国康复理论与实践２０１０年４月第１６卷第４期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｔｈｅｏｒｙ Ｐｒａｃｔ，Ａｐｒ．２０１０，Ｖｏ１．１６，Ｎｏ．４ ・ ３１３ ・ 小鼠空间学习记忆能力的趋势，但前者的作用更强，提 示ＣＢ—ＮＧＦ的疗效优于ＮＧＦ。有实验证明，ＮＧＦ滴 鼻给药要比静脉给药到达脑内的浓度高得多ｌ７］，而我 们的实验结果说明，ＣＢ—ＮＧＦ耦修复联后，能够促进 ＮＧＦ经鼻腔进入颅内，增加了ＮＧＦ在脑内的浓度。 进入脑内的外源性的ＮＧＦ一方面可以保护斜角带胆 碱能神经元，促进投射纤维乙酰胆碱的释放；另一方面 还可以增加内源性ＮＧＦ的利用，从而改善小鼠的认知 功能 。 经鼻腔向脑内递药的方法在我国古代就有记载： 《伤寒杂病论》载有“薤捣汁，灌鼻中”，起到开窍回苏的 急救作用；《世医得效方》用细辛末吹鼻，治疗暗风卒倒 不省人事；中医学更有“纳鼻而通十二经”。现在因经 鼻给药的优点颇多如药物剂量低、吸收迅速、无首过效 ［ ［应、给药方便等，而得到广泛的应用，缩胆囊素、抗利尿 激素、胰岛素样生长因子等经鼻给药后，直接发挥中枢 作用 。。。药物经鼻黏膜吸收入脑主要有３条通路： 嗅神经通路、嗅黏膜上皮通路和血液循环通路。推测 ＣＢ ＮＧＦ主要通过嗅神经通路到达嗅球。人的嗅觉黏 膜中约有５００万个嗅觉神经元，ＣＢ＿ＮＧＦ与嗅觉细胞 胞膜的ＧＭ１结合，通过内吞作用进入胞体，经轴浆转 运到达嗅球，ＣＢ－ＮＧＦ在胞体内降解分开，发挥各自的 作用；少量的药物通过嗅黏膜上皮间隙吸收，沿嗅神经 通路胞外转运进入嗅球，或经鼻黏膜下毛细血管进入 脑脊液。而ＮＧＦ滴鼻给药主要通过嗅黏膜上皮间隙 进脑口 ，所以，耦修复联后的ＣＢ—ＮＧＦ比ＮＧＦ更容易 进入脑内。 从理论上推测，ＮＧＦ与ＣＢ耦修复联后，一是增加 ＮＧＦ进入嗅球的途径，使脑内含量增加，保护胆碱能 神经元；二是ＣＢ通过ＧＭ１可能发挥一定的保护和促 突触发生作用，因此，ＣＢ－ＮＧＦ的疗效要优于单纯的 ＮＧＦ给药。本实验中ＣＢ—ＮＧＦ滴鼻虽然仅得到改善 胆碱能神经元和拟痴呆小鼠空间学习记忆能力的治疗 趋势，但作用确实明显优于ＮＧＦ。我们还需要在多种 动物模型上验证ＣＢ—ＮＧＦ滴鼻的治疗效果，追踪其脑 内的分布和代谢途径。总之，ＣＢ—ＮＧＦ耦修复联物是 很有开发前景的治疗ＡＤ的新一代生物制剂。 ［参考文献］ Ｅ ｌ￣Ｓｉｅｇｅｌ ＧＪ，Ｃｈａｕｈａｎ ＮＢ．Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ａｎｄ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｂｒａｉｎＥＪ￣．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｒｅｖ，２０００，３３： １９９—２２７． Ｅ２３Ｌａｄ ＳＰ，Ｎｅｅｔ ＫＥ，Ｍｕｆｓｏｎ ＥＪ．Ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：ｓｔｒｕｃ ｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅＥＪ］．Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ＣＮＳ Ｎｅｕｒｏｌ Ｄｉｓｏｒｄ，２００３， ｒＬ ｒＬ ｒＬ ｒＬ ｒＬ ｒＬ
