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经大孔树脂AB-8纯化的月季花色素的光谱特性及稳定性分析

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18 2007。Vo/.28。NO。07 食品研究与开发 科学研究 经大孔树脂AB一8纯化的月季花色素 的光谱特性及稳定性分析 常丽新。闰峰。孔学鹏。刘晶芝。冯玉珠。王莉 (河北师范大学职业技术学院,河北石家庄050031) 摘要:对经大孔树脂AB一8分离纯化的月季花色素的光谱特性、溶解性、稳定性进行了分析。结果表明:月季花色素 最大吸收波长是366 nm;不溶于非极性有机溶剂,而溶于强极性溶剂;对光、热、还原剂不太稳定;对酸碱、氧化剂比 较稳定;常见金属离子中,Fe“、cu“、 对其有很大影响。 关键词:月季花色素;光谱特性;稳定性 A ALYSIS ON SPECTRUM AND STABILI l’Y OF THE R0SE FLOWERS PlGME l’BY PURIFING OF RESIN AB-8 CHANG Li-xin,YAN Feng,KONG Xue-peng,LIU Jing-zhi,FENG Yu-zhu,WANG Li (Vocation-Technical CoHege,Hebei Normal University,Shijiazhuang 05003 1,Hebei,China) Abstract:Spectrum and stability of the rose flowers pigment wel ̄e studied.The results showed that the largest absorption was 366 nm.The rose flowers pigment dissolved in polar solvents,but didn’t dissolve in unpolar or- ganic solvents.It was not stable to light,temperature and reduction,but it was resistant to acid and alkali,oxidants. he Tpiment gwas sensitive to Fe2 ̄,Cu2+,A1 . Key words:rose flowers piment;spectgrum;stabiliy t月季花别名月月红、四季花、艳雪红,学名:Rosa 1.1.2仪器 chinensis Jacq,英文名:Chinese Rose。为蔷薇科,落叶或 常绿灌木,品种繁多,花色绚丽,是我国的十大传统名 花之一,在我国有着悠久的种植历史,北京、天津、郑州 等30多个城市选其作为市花。有花中“皇后”之美称, 为美化城市的重要花木,可配植成专类园,也是世界四 大切花之一。干花可入药,具有活血调经、消肿解毒之 电子天平、SZF一061型粗脂肪测定仪、RE一52AA 型旋转蒸发器、GZK-45型真空干燥箱、电热恒温水浴 锅、uV一755B型紫外一可见分光光度计。 1.2实验方法 1.2.1月季花色素的提取纯化工艺和流程 1.2.1.1月季花色素的提取纯化工艺 功效[1】。资源广泛,具有很高的开发利用价值。 本文利用95%乙醇从月季花中提取花色素[21,并 用AB一8对其进行了分离纯化囝,对纯化后色素的光谱 特陛、溶解性和稳定性进行了研究。 1材料和方法 将采来的月季花瓣快速用自来水冲洗干净,然后 用蒸馏水快速冲洗一遍后,用干净的干纱布吸净花瓣 表面的水珠。放入30℃一50℃干燥箱中烘干,研成粉 末;按固液比1:20加入95%乙醇,在40℃于粗脂肪 测定仪上回流提取2 h,过滤,滤渣按固液比1:5再回 流提取两次,合并滤液;旋转蒸发器浓缩至粘稠状,上 层析柱分离纯化(层析柱以大孔吸附树脂AB一8填充, 树脂使用前用95%乙醇浸泡24 h后用蒸馏水洗至中 性),以蒸馏水洗脱杂质,而后以0.1%盐酸无水乙醇作 为洗脱液洗脱色素,控制流速为3.5 mL/min,收集色素 溶液,用旋转蒸发器浓缩,而后在40℃真空干燥箱中 干燥,得暗红色色素样品。 1.1材料和仪器 1.1.1材料 月季花采自于河北师范大学职业技术学院校园。 基金项目:河北省科技厅科技攻关项目(06240223一D) 作者简介:常丽新(1965一),女(汉),硕士研究生,教授,硕士生导师 研究方向:天然产物的研究与开发。 维普资讯 http://www.cqvip.com

科学研究 1.2.1.2月季花色素的提取流程 食品研究与开发 2oo7.VoL28.NO.o7 j 9==- 1.2.4.6还原剂对月季花色素稳定性的影响 将维生素c配制成浓度为0.0.1%、0.2%、0.5%、 1.0%、2.0%的溶液。 采花_÷快速冲洗 烘干_÷研末_÷回流提取_÷过 滤_÷浓缩_÷柱层析提纯_÷浓缩_÷真空干燥_÷得色素 样品 取色素溶液10 mL,分别加人10 mL上述不同浓 度的维生素c溶液,放置1 h,在最大波长下测定其吸 收光谱。 1.2.2月季花色素的光谱特性分析 称取0.03 g色素样品,溶于10mL甲醇中并用水 定容至100 mL,在350 am~600 am波长下测定其吸收 光谱。 1.2.3月季花色素的溶解性实验 称取0.03 g色素样品分别溶于10 mL水、石油醚、 乙醇、丙酮、甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、正丁醇、甲酸、 0.1%盐酸、0.5%柠檬酸中,观察颜色变化及溶解性。 1.2.4月季花色素的稳定性分析 称取0.3 g色素样品,溶于100mL甲醇中并用水 定容至1 000mL。配制成0.03%的色素溶液,以备以 越 下实验所用。 1.2.4.1温度对月季花色素稳定性的影响 取色素溶液4份各100mL于4个容量瓶中,分别 置于30℃、60℃、80℃、100℃水浴中加热1 h,冷却 至室温,在最大波长下测定其吸收光谱。 1.2.4.2光对月季花色素稳定性的影响 取色素溶液2份各50mL于2个容量瓶中,一个 置于光照处,一个置于阴暗处,在最大波长下分别测定 放置1、2、3、4、5、6、7 d时的吸收光谱。 1.2.4.3酸碱度对月季花色素稳定性的影响 用0.2 mol/L的磷酸氢二钠和0.2 mol/L的磷酸二 氢钠溶液配制成pH值为5.7、6.0…6 3 6.8…7 0 7.3、7.7、 8.0的磷酸盐缓冲溶液。 取色素溶液10 mL,分别加入10 mL pH值为5.7、 6.0、6.3、6.8、7.0、7.3、7.7、8.0的磷酸盐缓冲溶液, 充分混合均匀,放置1 h,在最大波长下测定其吸收 光谱。 1.2.4.4金属离子对月季花色素稳定性的影响 配制浓度为0.0.01%、0.05%、0.1%的氯化钠、氯 化钾、氯化钙、氯化镁、氯化锌、氯化铜、三氯化铁、 铝溶液。 取色素溶液10 mL,分别加入10 mL上述不同浓 度的金属离子溶液,充分混合均匀,放置1 h,在最大波 长下测定其吸收光谱。 1.2.4.5氧化剂对月季花色素稳定性的影响 将双氧水配制成浓度为0、0.01%、0.05%、0.1%、 0.2%的溶液。 取色素溶液10 mL,分别加入10 mL上述不同浓 度的双氧水溶液,放置1 h,在最大波长下测定吸光度。 2结果与讨论 2.1月季花色素的吸收光谱特性(见图1) 波长 Wavelength/nm 图1 月季花色素的吸收光谱特性 Fig.1 Absorption spectrum of rose lfowers pigment 由图1可知,月季花色素在紫外光区366 am处有 一最大吸收峰,其吸收值为0.487,这说明月季花色素 为花青素。 2.2月季花色素的溶解性实验 观察发现月季花色素不溶于石油醚、乙酸乙酯,微 溶于水、冰醋酸、正丁醇、丙酮、乙醇呈淡粉红色,易溶 于甲醇、甲酸、0.1%盐酸、0.5%柠檬酸,溶于甲醇呈玫 瑰红色,溶于甲酸、0.1%盐酸、0.5%柠檬酸,呈桔红色。 这说明:月季花色素不溶于石油醚、乙酸乙酯等非极性 有机溶剂,而溶于甲醇、甲酸等强极性溶剂。因为月季 花色素溶于甲醇呈玫瑰红色,为月季花本色,所以本实 验用甲醇作为月季花色素的溶剂。 2.3月季花色素的稳定性分析 2.3.1温度对月季花色素稳定性的影响(见图2) 1 0.8 O.6 O.4 O.2 O 30 6U 8O儿 温度,℃ Temperature/ ̄C 图2温度对月季花色素稳定性的影响 Fig.2 EffectoftemperatureonM.abiHtyofthe rI flowerspigment 由图2可知,月季花色素在30℃~60℃,吸光度 随着温度的升高变化不明显,超过60℃后吸光度随着 维普资讯 http://www.cqvip.com

2D 2oo7.Vo/.28.N0.07 食品研究与开发 科学研究 一温度的升高则有所变化,60℃~80℃吸光度随着温度 的升高渐有增加,超过80℃吸光度随着温度的升高略 有下降。这说明月季花色素对60℃以下的低温比较稳 定,超过60℃后对热的稳定性减弱。 2.3.2酸碱度对月季花色素稳定性的影响(见图3) 0.35 03 0 25 0.2 0 15 0.1 0.05 0 图3酸碱度对月季花色素稳定性的影响 Fig.3 Effect of pH value on stability of the rose lfowe ̄pigment 由图3可知:月季花色素在pH5.7~8.0的磷酸缓 冲溶液中吸光度无明显变化。这说明月季花色素在 pH5.7~8.0范围内具有较好的耐酸碱性。 2.3.3光对月季花色素稳定性的影响(见图4) 时间/d Time/d 图4光对月季花色素稳定性的影响 Fig.4 Effect of light on stability of the rose lfowe ̄pigment 由图4可知:月季花色素在光照处和阴暗处放置 时,随放置时间的延长,其吸光度均有明显的变化,且 都呈上升的趋势。但在光照处的吸光度的变化比阴暗 处的吸光度变化更为明显。这说明月季花色素对光不 太稳定,保存时宜避光。 2.3.4氧化剂对月季花色素稳定性的影响(见图5) 0.6 0-4 0.2 0 双氧水的浓度 Concentration of H202/% 图5氧化剂对月季花色素稳定性的影响 Fig.5 Effect of oxidation on stability of the rose lfowe ̄pigment 由图5可知:随氧化剂双氧水浓度的增大,月季花 色素的吸光度无明显变化,这说明月季花色素的耐氧 化性较强。 2.3.5还原剂对月季花色素稳定性的影响(见图6) 0・6 0.4 ・ 0-2 0 维生素c的浓度/% Concentration of Vc/% 图6还原剂对月季花色素稳定性的影响 Fig.6 Effect of reducation on stability of the rose lfowers pigment 由图6可知:随还原剂V 浓度的增大,月季花色 素的吸光度呈上升趋势,这说明月季花色素的抗还原 性较差。 2.3.6金属离子对月季花色素稳定性的影响(见图7) 一 ■0 ■0.01塌 囵0.05鸟 f 口0.10鸟 I丌. ._ ]. . .■ .嗣. Na Mg Cu Zn Fe3+ Al3+ Ca K 金属离子的浓度 Concentration of metal ion 图7金属离子对月季花色素稳定性的影响 Fig.7 Effectofmetal ionon stabilityofthe roseflowe ̄pigment 由图7可知:Na+对月季花色素的吸光度无明显 影响, 、ca2+、M 、zn 对月季花色素的吸光度有些影 响但不大,Fe 、cu 、Al 对月季花色素的吸光度的影 响比较明显。所以,月季花色素在贮存时不能使用铁 器、铜器和铝器。 3结论 经大孔树脂AB一8分离纯化后的月季花色素为 花青素,最大吸收波长为366 nm;不溶于石油醚、乙 酸乙酯等非极性有机溶剂,而溶于甲醇、甲酸等强极 性溶剂;对光、热、还原剂不太稳定,对酸碱、氧化剂比 较稳定;常见金属离子中,Fe2+、Cu2+、Ap+对其有很大 影响。 维普资讯 http://www.cqvip.com

科学研究 禽蠡硪究笔秀 2oo7.Vo1.28.NO.07 2l====.I 纳豆菌B一12产纳豆激酶条件及酶学性质研究 祖国仁,张超。孔繁东,刘阳,王聪,季英,赵昭,谭晓慧 (大连轻工业学院生物与食品工程学院,辽宁大连116034) 摘要:以纳豆菌B一12为出发菌株,对其液体发酵产纳豆激酶的条件及纳豆激酶部分酶学性质进行了研究。实验研 究了碳源、氮源、接种量、发酵时间、发酵温度和培养基初始pH值对纳豆茵B一12产酶的影响,在优化发酵条件下, 纳豆茵B一12产酶量相当于尿激酶903 IU/mL。纳豆激酶在5O qC,热稳定性较好,保温100 min残余酶活力保持80% 左右;在pH6.0 9.0较稳定,残余酶活力保持在近80%左右;金属离子Fe 、Al 对纳豆激酶有明显的抑制作用,Zn 有微弱的促进作用。 关键词:纳豆激酶;发酵;酶性质;纳豆茵 STUDY ON THE CONDITIONS OF PRODUCTING NATTOKINASE BY C儿 ( J7、 册STRAIN B一12 AND THE ENZYME PROPERTY OF NATTOKINASE ZU Guo—ren,ZHANG Chao,KONG Fan—dong,LIU Yang,WANG Cong,JI Ying,ZHAO Han,TAN Xiao-hui (School of Biological and Food Engineering,Dalian Institute of Light Iridustry,Dalian 1 1 6034,Liaoning,China) Abstract:The conditions of producing nattokinase by Bacillus natto strain B——12 and the partial enzyme proper—— ties of nattokinase were researched,nd the efafects of carbon source,nirogen source,tfermentation time,fermenta— tion temperature and original media pH on production of nattokinase were investigated in this paper.Based on 0p— timized conditions for fermentation.the yield of nattokinase by Bacills natto sturain B一12 was 903 IU Uroki— nase/mL.Nattokinase was stable.and the residual activity was about 80%at 50℃for 100 min.It was also stable in pH6.0—9.0,nd ahe tresidual activity was about 80%.Fe and A13十could obviously inhibit enzyme activity,nd aZn could fain@activate he tactiviy.t Key words:nattokinase;fermentation;enzyme property;Bacillus natto 纳豆激酶(Nattokinase,NK)最初是从纳豆中发现 副作用[31。目前,纳豆及纳豆激酶作为现代食品和功能 食品的研发得到国内外普遍重视,据报道纳豆激酶制 的,是纳豆菌(Bacillus rtcttto)在发酵大豆时向胞外分泌 的一种易溶于水的碱性丝氨酸蛋白酶。1987年,从日 本的Sumi H等人首次发现并在文章中介绍了这种蛋 白酶的纤溶活性,并定名为纳豆激酶至今一直为人们 品具有很强的溶解纤维蛋白作用,降低血液粘度、降血 脂、降胆固醇等多种生理功能,以纳豆激酶为主要成分 的功能性食品、食品添加剂和普通食品的发展十分迅 速,其开发前景广阔嗍。 关注的热点 。近年来实验研究证实,纳豆激酶不仅易 于提取;成本低廉,而且由于它来源于食品,无任何毒 项目资助单位:辽宁省教育厅A类科技项目,项目编号:2004D229 作者简介:祖国仁(1963一),男(汉),副教授,硕士,研究方向:微生物 近年来,课题组先后分离筛选到数株产纤溶酶高 活力菌株,对其液态发酵产纳豆激酶的条件进行了优 化,并对纳豆激酶部分酶学性质进行初步研究,为开发 纳豆激酶保健食品奠定基础。 活性物质。 参考文献: 【1]杨百荔,陈棣,陈于化.月季花【M].北京:中国建筑出版社,2003: 8—9 的清除作用研究[JJ.食品科学,2005,26(7):99—102 【3] 马银海,李维莉,彭永芳,等.叶子花红色素提取工艺的优化[J1 _食品科学,2003,24(1):78—8O 收稿日期:2006—12—05 【2]常丽新,张丽芳,杜密英,等.月季花色素的稳定性及对亚盐 

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